輔酶2 NADP(H)含量(WST-8法)檢測試劑盒(微量法)

品牌：紀寧生物
貨號：JN40411
規(guī)格： 48樣

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產(chǎn)品詳情

中文名稱： 輔酶1 NAD(H)含量 (WST-8法)檢測試劑盒(微量法)

產(chǎn)品規(guī)格：微量法/48樣

檢測波長： 450nm

檢測原理： WST-8法

測定意義

輔酶Ⅱ NADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，NADP+和 NADPH 含量測定可以計算 NADP （NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。 NADPH/NADP+比值不僅是細胞氧化還原態(tài)的主要標志之一，而且在 PPP 途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

測定原理

分別用提取液提取樣品中NADP+和NADPH。在1-mPMS作用下，WST-8可與NADPH 反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰，而NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH，進一步采用 WST-8 檢測。

需自備的儀器和用品

酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。

測定步驟：

1、酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。

2、工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量，按以下比例配制工作液。

試劑名稱（μL）	工作液
試劑一	100
試劑二	50
試劑三	10

3、樣本測定

按下表在96孔板中加入如下試劑

試劑名稱（μL）	測定管
樣本	50
測定工作液	150
充分混勻，于450nm下測定吸光值A(chǔ)1，37℃避光孵育30min，450nm下測定吸光值A(chǔ)2，△A=A2-A1。

預(yù)實驗的意義

比色法檢測試劑盒預(yù)實驗非常重要

1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測，以免造成試劑盒和樣本的浪費（比如低表達處理的樣本）；

2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測定；

3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；

4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題，以便于及時作出調(diào)整；

5、通過3 - 5組預(yù)實驗，判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實驗樣本稀釋比例。

注意

正式測定前務(wù)必取 3 - 5 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

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