英文名稱 ：Caspase-5Activity Assay Kit
儲(chǔ)存條件 ：-20℃
產(chǎn)品包裝 ：盒裝
檢測(cè)方法 ：比色法
有 效 期 ：6個(gè)月
產(chǎn)品規(guī)格 ：20T 、50T 、100T
產(chǎn)品組成：
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試劑名稱/規(guī)格
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20T
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50T
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100T
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保存條件
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試劑一
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液體20mL×1瓶
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液體20mL×1瓶
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液體25mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑二
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液體30mL×1瓶
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液體60mL×1瓶
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液體120mL×1瓶
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-20℃保存
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試劑三
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液體0.25L×1支
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液體0.55mL×1支
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液體0.55mL×2支
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-20℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品
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液體1mL×1支
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液體1mL×1支
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液體1mL×1支
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-20℃保存
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產(chǎn)品說(shuō)明：
Caspase是參與細(xì)胞凋亡過(guò)程的蛋白酶家族，包含10多個(gè)成員。Caspase-5分子量47.7kD，與ICE有51%的同源性，在過(guò)量表達(dá)時(shí)可誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。
Caspase-5特異水解其多肽底物N-acetyl-Trp-Glu-His-Asp-p-nitroanilide(Ac-WEHD-pNA)，釋放出游離的硝基苯胺pNA，后者呈黃色在405nm具有大吸收峰，采用可見(jiàn)光光度比色法進(jìn)行測(cè)定，吸光度值對(duì)應(yīng)于Caspase-5的水解活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、100μL玻璃比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
1、由于試劑二中含有還原劑（DTT），建議將樣本用水稀釋2倍后，用Bradford法測(cè)定蛋白濃度，以降低DTT對(duì)蛋白濃度測(cè)定的干擾。不建議使用BCA法測(cè)定蛋白濃度。
2、Caspase活性測(cè)定值低常見(jiàn)的原因是細(xì)胞未發(fā)生凋亡或細(xì)胞量太少，其次是觀測(cè)時(shí)間不恰當(dāng)。誘導(dǎo)凋亡時(shí)，并非劑量越大時(shí)間越長(zhǎng)Caspase活性就越高。建議設(shè)置不同劑量和時(shí)間點(diǎn)如0、2、4、8、16、24小時(shí)，以檢測(cè)佳的觀察點(diǎn)。
3、所測(cè)樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限時(shí)，可用試劑二稀釋樣本后重新測(cè)定。
4、蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37oC孵育，肉眼可見(jiàn)顏色變黃時(shí)的OD405值約為0.2，此時(shí)即可測(cè)定。顏色變化不明顯可延長(zhǎng)反應(yīng)或過(guò)夜，但酶活性較強(qiáng)時(shí)，孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)將導(dǎo)致反應(yīng)失去線性關(guān)系。
